天津醫科大學朱憲彝紀念醫院陳莉明教授團隊在Acta Diabetologica上發表了一項新研究，是國內初次成功應用3-Screen ICA ELISA檢測表型為2型糖尿病患者的糖尿病自身抗體。英國RSR和天津阿斯爾共同參與了這項研究。
編者按
雖然單項胰島細胞自身抗體的檢測具有很好的敏感性、特異性且標準化的操作，但并不適合用于大樣本篩查，而3-Screen已被證明在大規模人群篩查和預測1型糖尿病（T1DM）中是一種有力工具。近日，天津醫科大學朱憲彝紀念醫院陳莉明教授團隊在Acta Diabetologica上發表了一項新研究，是國內初次成功應用3-Screen ICA™ ELISA檢測表型為2型糖尿病（T2DM）患者的糖尿病自身抗體。下面，我們一起來看看這項研究。
要點概覽
利用3-Screen檢測方法在中國成人T2DM患者中鑒定出3.5%（44/1273）的患者呈糖尿病自身抗體陽性（歸類為LADA）。
3-Screen陽性患者相對于典型的T2DM具有LADA“三低一高"的特征：更低的BMI、更低的空腹胰島素和C肽水平，更高的HbA1c水平。同時有更高的DKA風險和/或胰島素治療需求。
3-Screen陽性患者有發生相關自身免疫疾病的風險，特別是自身免疫性甲狀腺疾病。
3-Screen檢測將助力LADA患者的臨床診斷，減少衛生服務負擔。
3-Screen ICA™ ELISA檢測試劑盒具有方便、經濟且一步式的特點，適用于大量樣本的篩查。
引言
成人隱匿性自身免疫糖尿病（LADA）是一種緩慢起病的自身免疫糖尿病。對其在糖尿病中的分型研究，經歷過以下幾個階段：① 1999年WHO對糖尿病進行分型時，將LADA歸類于自身免疫介導T1DM的緩慢進展亞型；② 2019年WHO分型更新，將LADA和酮癥傾向的T2DM歸類于混合型糖尿病；③ 2020年ADA指南指出，LADA存在自身免疫β細胞破壞，屬于T1DM。LADA臨床表型雖與T2DM重疊，但病理機制與T1DM相似，均為胰島自身免疫[1]。
根據2015年發表的全國多中心的LADA China研究報道，使用單一谷氨酸脫羧酶抗體（GADAb）篩查，在新發T2DM患者中LADA患病率達5.78%；聯合GADAb、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2Ab）和鋅轉運體-8抗體（ZnT8Ab）等多抗體篩查，LADA患病率為8.63%[2]。此外，ADOPT研究報告稱，北美新發確診T2DM患者中GADAb陽性率為4.7%，歐洲為3.7%[3]。
雖然單項胰島細胞自身抗體（GADAb、IA-2Ab和ZnT8Ab）的檢測具有很好的敏感性、特異性且標準化的操作[4-6]，但由于成本和檢測時間的原因，不適合用于大量樣本的篩選。3-Screen是一種新型的ELISA檢測方法，可聯合檢測血清中GAD、IA-2和ZnT8三種抗體，且單項自身抗體的檢測結果與3-Screen的檢測結果一致[7]。3-Screen已被證明在大規模人群篩查和預測T1DM中是一種有力工具。例如，在T1DM Fr1da研究中，90 632例巴伐利亞兒童最初采用3-Screen篩查，其中280例（0.31%）發現多種β細胞自身抗體陽性[8]。
陳莉明教授團隊使用新型3-Screen ICA™ ELISA（3-Screen）試劑盒聯合檢測單個血清樣本中的GADAb、IA-2Ab和ZnT8Ab，旨在評估糖尿病相關自身抗體在新近確診為成年發病型T2DM的中國患者中的檢出率，并評估自身抗體標志物對表征疾病表型的潛在價值，尤其是在3-Screen陽性患者與3-Screen陰性患者的臨床特征和代謝譜方面。3-Screen檢測的輔助和特征性疾病表型的識別，有助于為具有糖尿病自身抗體的成人T2DM患者及時正確地量身定制治療方案。
材料和方法
01
患者
一項基于醫院的橫向研究在中國天津醫科大學朱憲彝紀念醫院進行。2014年4月~2016年10月，1273例診斷為T2DM表型的患者根據特定標準被納入研究：（a）≥18歲患者空腹血糖≥7.0 mmol/L、餐后及隨機血糖≥11.1 mmol/L診斷為糖尿病；（b）病程<1年；（c）診斷糖尿病后6個月內無糖尿病酮癥酸中毒（DKA）。所有1273例T2DM表型患者被分配到不同的治療方案，包括口服糖尿病藥物或胰島素治療，或如果患者不能通過飲食和運動維持目標血糖水平，則兩者聯合。
02
抗體檢測
對該研究中1273例患者血清樣本使用3-Screen ICA™ ELISA檢測自身抗體。所有3-Screen（>10 U/ml）陽性患者均采用RSR公司提供的單項ELISA法檢測GADAb、IA-2Ab和ZnT8Ab。所有3-Screen陽性樣本也檢測了其他器官特異性自身抗體，包括促甲狀腺激素受體（TSHR）抗體、甲狀腺過氧化物酶（TPO）抗體、甲狀腺球蛋白（Tg）抗體和類固醇21-羥化酶（21-OH）抗體。
結果
01
T2DM患者中糖尿病相關自身抗體的
檢出率為3.5%
在研究的1273例T2DM患者中，有44例（3.5%）3-Screen陽性。而在這44例患者的單項自身抗體檢測中，GADAb陽性者35例（80%），IA-2Ab陽性者5例（11%），ZnT8Ab陽性者12例（27%）。6例3-Screen陽性樣本在單項抗體ELISA試劑盒檢測中為陰性（圖1）。
圖1. 44例3-Screen ICA™ ELISA陽性（>10 U/ml）患者GADAb、IA-2Ab和ZnT8Ab的維恩圖
02
3-Screen陽性的T2DM患者
無顯著的年齡特征差異
結果顯示，不同年齡組間3-Screen陽性率無顯著差異（P=0.06，圖2）。
圖2. 3-Screen陽性的T2DM患者的年齡差異
03
3-Screen陽性的T2DM患者
具有顯著的臨床特征
表1. T2DM表型患者3-Screen陽性組和3-Screen陰性組的臨床特征
（點擊查看大圖）
表2. 3-Screen陽性患者是否伴有DKA和/或胰島素治療的特征（使用分類數據分析）
（點擊查看大圖）
04
LADA患者易伴發甲狀腺自身免疫疾病
自身免疫性糖尿病與其他器官特異性自身免疫性疾病存在聯系。表2中44例3-Screen陽性患者中，20例（46%）至少存在1種甲狀腺自身抗體。而在該20例患者中，4例（20%）在功能指標上體現為甲狀腺功能減退。與先前的觀察結果一致，這提示胰島細胞自身抗體陽性的成人糖尿病患者有發展為相關自身免疫疾病的風險，尤其體現在甲狀腺自身免疫疾病上。
總結
3-Screen ICA™ ELISA可聯合檢測血清中GAD、IA-2和ZnT8三種糖尿病自身抗體。本研究中呈現3-Screen陽性的成人糖尿病患者表現出與胰島β細胞功能低下相關的特征性臨床表型。由此提示，該類患者在糖尿病確診后的疾病管理中更應獲得密切的健康監測，尤其是胰島素治療的需求。由于LADA在臨床特征上存在高度異質性，在制定治療方案方面，特別是延緩胰島β細胞功能減退的針對性措施，需要對新發的非T1DM進行準確診斷和分型。在分型依據之一的自身抗體檢測中，與傳統的單項檢測相比，聯合檢測具有方便、經濟且一步式的特點，適合新發糖尿病患者的自身抗體大樣本篩查。相信在將來的自身免疫糖尿病疾病診療中，3-Screen聯合檢測將會助力LADA患者的臨床診斷，減少衛生服務負擔。
專家簡介
陳莉明
天津醫科大學朱憲彝紀念醫院
主任醫師，教授，博士生導師
國務院特殊津貼專家，國家衛健委突出貢獻專家
海河學者，天津名醫，天津市高校人才
中華醫學會糖尿病學分會副主任委員
中國微循環學會糖尿病與微循環學會副主任委員
天津糖尿病學會主任委員
國家自然科學基金評審人
《Diabetes Metabolism Research and reviews》《中華內分泌代謝雜志》《中華臨床營養雜志》編委，《中華糖尿病雜志》副主編，《國際內分泌與代謝病雜志》主編
參考文獻
1. 中國醫師協會內分泌代謝科醫師分會, 國家代謝性疾病臨床醫學研究中心. 成人隱匿性自身免疫糖尿病診療中國專家共識(2021版). 中華醫學雜志. 2021; 101(38): 3077-3091.
2. Xiang Y, Huang G, Shan Z, et al. Glutamic acid decarboxylase autoantibodies are dominant but insufficient to identify most Chinese with adult-onset non-insulin requiring autoimmune diabetes: LADA China study 5. Acta Diabetol. 2015; 52(6): 1121-1127.
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GAD antibody-positive recently diagnosed patients with type 2 diabetes in North America and Europe. Diabetes. 2004; 53(12): 3193-3200.
4. Bingley PJ, Bonifacio E, Mueller PW. Diabetes Antibody Standardization Program: first assay proficiency evaluation. Diabetes. 2003; 52(5): 1128-1136.
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7. Amoroso M, Achenbach P, Powell M, et al. 3 Screen islet cell autoantibody ELISA: A sensitive and specific ELISA for the combined measurement of autoantibodies to GAD65, to IA-2 and to ZnT8. Clin Chim Acta. 2016; 462: 60-64.
8. Ziegler AG, Kick K, Bonifacio E, et al. Yield of a Public Health Screening of Children for Islet Autoantibodies in Bavaria, Germany. JAMA. 2020; 323(4): 339-351.
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